新闻中心
News Center
行业动态
22
2023
-
02
核酸定量染料(二)
来源：
长沙瀚辰生物科技有限公司
核酸定量染料(二)
DNA定量染料可分为Invitrogen的SYBR系列染料和其他染料，Invitrogen的SYBR系列核酸凝胶染料包括SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR Green II 和SYBR Safe染料等;其他染料包括Pico Green、
OliGreen、 ssDNA 定量试剂、 EVAGreen荧光染料、 Hoechst荧光染料等。
1、SYBR Safe DNA凝胶染料
图1：SYBR Safe DNA 凝胶染料
Invitrogen SYBR Safe DNA(图1)凝胶染料是一种高灵敏度染料，适用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的 DNA 染色。SYBR Safe 染料采用独特的配方，作为溴化乙锭替代物，使用更为安全，可使用蓝光或紫外光进行激发。该染料也适用于凝胶上的 RNA 染色。
优势：
1)更出色的 DNA 染料——对人和环境无害，而且对样品和研究机构有利。
2)比溴化乙锭更安全——在 Ames 试验中，SYBR Safe 染料与溴化乙锭相比致突变性有所减少。
3)卓越的灵敏度——具有卓越的核酸可视化灵敏度，并且在蓝光照射激发时， SYBR Safe染料比紫外光照射的溴化乙锭–染色凝胶的背景荧光更少。
4)易于使用—可以混合成一种琼脂糖凝胶，用于在电泳过程中染色，或者电泳后在 SYBR Safe染料溶液中培养。
2、SYBR Gold核酸凝胶染料
图2：SYBR Gold染料
SYBR Gold (图2)染料是一种专有的非对称菁染料，结合核酸后，荧光会增强 >1000倍，并且结合双链或单链DNA或RNA后具有较高的量子产率(∼0.6)。用于检测变性尿素、乙二醛和甲醛凝胶中的DNA和RNA。染料-核酸复合物的最大激发波长为∼495 nm和∼300 nm，最大发射波长为∼537 nm。
优势：
1)超灵敏——灵敏度是溴化乙锭的 25–100倍。可检测低至25 pg的DNA;
2)提高了DNA克隆效率——可由蓝光透射激发，从而不会造成DNA损伤;
3)信噪比有所增加——与核酸结合时，信号增强超过1000倍;
4)通用性——可检测非变性、乙二醛、甲醛或尿素凝胶中的dsDNA、ssDNA RNA。
3、OliGreen ssDNA定量试剂
OliGreen是由美国分子探针公司提供，该寡核苷酸定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂，用于定量溶液中的寡核苷酸和单链DNA(ssDNA)。使用标准光谱荧光计和荧光素激发和发射波长定量低至100pg/ml的寡核苷酸或ssDNA;使用荧光酶标仪，可检测低至1 pg/ml寡核苷酸或ssDNA。
OliGreen试剂已用于检测血浆和血清样品中的磷酸二酯和硫代磷酸寡核苷酸，并开发一种灵敏的基于荧光的毛细管电泳方法，用于检测短链单链寡核苷酸。
4、EVAGreen荧光染料
EvaGreen是由Biotium的研发的新一代绿色荧光核酸染料(有专利)。它的诸多特点使它可以用于多种应用，包括：qPCR、高分辨率DNA熔解曲线(HRM)分析、常规的DNA定量以及毛细管电泳的DNA结合染料。
特性：该染料基于“按要求释放”DNA结合技术设计，结构上由两个单体染料分子通过一个弹性臂连接成一个二聚体，在没有DNA存在时，该结构呈无荧光环状结构，一旦有DNA出现，则恢复随机形态并与DNA结合发出强烈的绿色荧光。另外，EvaGreen® 染料是无毒、不致突变并且对水生生物没有危险性的!
该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I。除了有相似的光谱特性， EvaGreen有三个主要特点使它区别于SYBR Green I：
1)EvaGreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I，因此，使用EvaGreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。
2)EvaGreen在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于SYBR Green I扩增信号：高浓度的使用使EvaGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析(HRM)，该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。
3)EvaGreen 的稳定性极好。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反，SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。
5、Helixyte Green 双链DNA定量试剂
Helixyte Green dsDNA染料是美国AAT Bioquest生产的一种超灵敏荧光核酸染料，用于定量溶液中的双链DNA(dsDNA)。它具有与PicoGreen相同的光谱特性，因此是PicoGreen的绝佳替代品(。 Helixyte Green dsDNA染料用于定量分子生物学程序中的双链 DNA(dsDNA)，例如用于文库生产的cDNA合成和用于亚克隆的DNA片段纯化，以及诊断应用，例如定量 DNA 扩增产物和引物延伸测定。使用Helixyte Green dsDNA 定量试剂，可以在存在ssDNA、RNA和游离核苷酸的情况下选择性检测低至25 pg/ml的dsDNA。Ex/Em=490nm/525nm。
6、 UltraPure 溴化乙锭(EB)、碘化丙啶PI、Hoechst荧光染料
图3：UltraPure
UltraPure (图3)溴化乙锭是一种灵敏的荧光染料，用于检测琼脂糖凝胶和氯化铯 (CsCl) 梯度溶液中的核酸。UltraPure 溴化乙锭是一种以菲啶为核心的芳香族化合物(参见以下结构)。溴化乙锭的最大荧光激发波长为 300 nm 和 520 nm，最大发射波长为 600 nm。
图4：碘化丙啶
PI(图4，碘化丙啶, Propidium Iodide )是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。
图5：Hoechst类染料
Hoechst类染料(图5)属于经典的DNA选择性核酸染料，其可选择性标记DNA小沟槽。 Hoechst类染料具有紫外区激发绿光区发射的光谱特性，适用于配合多数在可见区发射的荧光探针。另外该类染料具有良好的选择性，不受RNA、蛋白质等物质干扰，可实现对DNA的灵敏检测。
长沙瀚辰生物科技有限公司是一家集化学、生物、分析、分离等多学科组成的复合型团队。致力于开发IVD及核酸药物关键试剂原料(如荧光染料、淬灭基团、化学发光、Linker、亚磷酰胺单体、dNTP、NTP、PEG等)，对进口产品实现国产替代，产品质量完全对标进口产品。
公司拥有众多高端仪器设备：2台NMR、14台大型质谱(包含Orbitrap Fusion，Q Exactive Orbitrap、ScieX TripleTOF 5600+)、超20台HPLC、5台GC-MS、超20台制备色谱、1台SFC、ICP-MS、离子色谱等。
2023年2月24-25日，上海IND2023感染性疾病先进分子诊断技术应用论坛，长沙瀚辰生物期待与您合作，互惠共利!
关键词：
长沙瀚辰生物科技有限公司,荧光染料,化学发光,GalNAc
相关新闻
相关新闻
