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17
2023
-
02
核酸定量染料（一）
来源：
长沙瀚辰生物科技有限公司
核酸定量染料（一）
核酸定量概述
DNA 定量和 RNA 定量一般称为核酸定量，通常测量样品中 DNA 或 RNA 的平均浓度，然后再进行下游实验。样品纯度也是准确计算样品中 DNA 或 RNA 浓度的重要考虑因素。常用的两种核酸定量光学技术：紫外可见测量和荧光测量。为样品、工作流程和通量选择适合的技术可实现RNA 或 DNA 准确定量，帮助防止下游实验失败，从而节省大量时间和金钱。
对微量的双链 DNA 进行定量在各种生物学应用中都显得非常重要，例如 cDNA 文库的构建;用于亚克隆的 DNA 片段的纯化;定量 DNA 扩增产物，在药物中DNA 分子残留的测定等。检测核酸浓度常用的方法就是检测核酸在 260nm (A260)处的光吸收，这一方法主要的缺点是单链核苷酸和单核苷酸会产生干扰信号，核酸样品中的杂质也会影响结果。光吸收不能区分 DNA 和 RNA，灵敏度也相对较低。
DNA定量染料
DNA染料可分为Invitrogen的SYBR系列染料和其他染料，Invitrogen的SYBR系列核酸凝胶染料包括SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR Green II 和SYBR Safe染料等;其他染料包括Pico Green、 OliGreen ssDNA 定量试剂、 EVAGreen荧光染料、 Hoechst荧光染料等。
1、Invitrogen的SYBR染料
Invitrogen的SYBR系列染料是对电泳凝胶中的DNA 进行染色的高灵敏试剂，与传统溴化乙锭凝胶染料相比，这些凝胶染料具有更高的灵敏度和更低的背景荧光。
其中以SYBR Green I (图1)核酸凝胶染料为代表：
图1：SYBR™ Green I
用途：可用于检测琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中双链 DNA (dsDNA)。
优势：
1)由于 SYBR Green I 对 dsDNA 具有更高的灵敏度，因此其特别适合用于存在污染性 RNA 或 ssDNA 可能模糊测定结果的检测。
2)SYBR Green I 染料具有极低的背景荧光，其光谱特性与现有仪器中的光源和滤光镜套件非常匹配，这使其成为与激光扫描仪配合使用的理想选择。
2、Pico green染料
Pico green(图2)染料是一种新型的dsDNA染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。
Pico green仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至pg级别的dsDNA;可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物;特异性好，基本不受ssDNA和RNA的影响，并且可以耐受一定浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白等干扰。目前使用Picogreen染料定量检测DNA已经广泛用于生物学检测，并被2010年版《中华人民共和国药典》选为药物残留DNA定量方法。
长沙瀚辰生物科技有限公司是一家集化学、生物、分析、分离等多学科组成的复合型团队。致力于开发IVD及核酸药物关键试剂原料(如荧光染料、淬灭基团、化学发光、Linker、亚磷酰胺单体、dNTP、NTP、PEG等)，对进口产品实现国产替代，产品质量完全对标进口产品。
公司拥有众多高端仪器设备：2台NMR、14台大型质谱(包含Orbitrap Fusion，Q Exactive Orbitrap、ScieX TripleTOF 5600+)、超20台HPLC、5台GC-MS、超20台制备色谱、1台SFC、ICP-MS、离子色谱等。
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关键词：
Pico green,长沙瀚辰生物科技有限公司,荧光染料,化学发光
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