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08
2023
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03
染料的NHS酯类
来源：
长沙瀚辰生物科技有限公司
染料的NHS酯类
荧光素、罗丹明和菁染料是广泛用于标记寡核苷酸的染料，其中，大部分可作为磷酰胺试剂或支持物结合的试剂，在固相寡核苷酸合成过程中使用，这种合成方法通常是制备荧光标记的寡核苷酸的最方便的方法，但在某些情况下，也希望采用其他方法，特别是对基本寡核苷酸脱保护条件更敏感的荧光团。如果在固相合成过程中没有加入荧光基团，就需要通过合成后的修饰将其与寡核苷酸结合。前者涉及使过量的活性酯与胺标记的寡核苷酸反应形成酰胺键，而后者则采用了叠氮和炔基修饰实体的环化反应，这两种方法都是非常有效和高产的
荧光素、ROX、硫化Cy3和硫化Cy5(图1),这些染料中的每一种都在可见光谱的不同区域发出荧光(表1)，并被广泛用于标记寡核苷酸、肽、蛋白质和其他含胺的分子/生物分子。虽然荧光素磷酰胺可以广泛获得，但ROX、硫化Cy3和硫化Cy5只能通过合成后的修饰连接到寡核苷酸上。
表1.四种荧光体的光谱特性
图1.新型NHS酯染料
荧光素NHS酯类
荧光素是一种非常重要的荧光团，羧基形式(FAM)被用于从免疫荧光到定量PCR的各种应用，且在寡核苷酸中特别受欢迎。荧光素亚磷酰胺及其载体，在寡核苷酸脱保护过程中，甲胺会与荧光素反应，形成非荧光杂质。但NHS酯法(使用6-FAM异构体)完全绕过了这个问题，当与5'-氨基修饰剂C6配对时，产生的产品将与5'-荧光素磷酰胺产生的产品相同;同样，NHS酯与氨基修饰剂C6 dT配对，将得到与用荧光素-dT磷酰胺得到的完全相同的产物。
ROX NHS酯类
与FAM、JOE和TAMRA一样，ROX是一种罗丹明染料，在dideoxy Sanger测序中发挥了重要作用，该染料本身也常用于qPCR应用中的被动参考染料。ROX不能以亚磷酰胺形式提供，因此将ROX NHS酯加入寡核苷酸是标准方法。
磺化Cy5/3 NHS酯类
Cy5和Cy3是流行的吲哚青荧光体，表现出低的、非特异性的结合和相对独立于pH值的荧光。与FAM NHS不同，这些Cy NHS酯与它们的磷酰胺类对应物的结构不一致，且连接剂是不同的，每个试剂都含有2个直接在吲哚青核上的磺酸盐替代物。磺酸盐使染料不易聚集，并且不会明显改变其荧光特性。磺化Cy5、磺化Cy3的NHS酯染料高度溶于水，用户可以选择不使用DMF或DMSO来溶解。
长沙瀚辰生物科技有限公司是一家集化学、生物、分析、分离等多学科组成的复合型团队。致力于开发IVD及核酸物料(如荧光染料、荧光淬灭剂、生物素标记物、Linker、化学发光、亚磷酰胺单体、dNTP、NTP等)，对进口产品实现国产替代，产品质量完全对标进口产品。
关键词：
长沙瀚辰生物科技有限公司,荧光染料,化学发光,GalNAc
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