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28
2022
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吖啶衍生物对比
来源：
长沙瀚辰生物科技有限公司
吖啶衍生物对比
一、几种常用吖啶衍生物对比
1）发光性能比较
由于1~6号吖啶，它们的发光母体与机理一致，其发光性能差别不大。
2）标记方式的区别
由于抗体的实质是蛋白，其含有胺基，可直接与1～6号(NHS活性酯)发生反应，进行偶联;
4号为吖啶羧酸，需要加入缩合剂EDCI等，才能与含胺基的蛋白发生偶联反应;
6号为吖啶酰肼，含有游离氨基，吖啶酰肼末端适用直接偶联含有醛基的多糖,核酸或者蛋白质等。
3）抗水解性能与稳定性
1～3号均在苯环上增加了甲基修饰，增大了位阻，增强了抗水解性，它们在室温下，在pH为7.0的PBS缓冲液中很稳定，16天后，发光活性只降低3.6%。
4～6号则是引入了磺酰胺基团，其稳定性较吖啶酯类(1～3号)高，其原因是由C-N键与C-O键的键级不同，
C-N键大于C-O键。
吖啶酰胺类化合物(4～6号)抵抗水解的能力也强于吖啶酯类(1～3号)化合物。4～6号在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定，与蛋白质偶联物在室温下保存4周，其光量子产率不降低，冻干品在-20℃下，可以保存一年以上。
4）亲水性
3～6号在1～2号的基础上，在亲水性上进行了修饰，引入了丙磺酸内盐，增加了其水溶性，使其与抗体、核酸等形成的标志物有水溶性，在之后的发光检测可以在水中进行。
二、稳定性及保存方式
1）吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH小于4.8)都很稳定。
2）该类化合物及其与蛋白的偶联物在室温下保存4周，其光量子产率不降低;冻干品在-20℃下，可保存一年以上。
3）当pH大于4.8(尤其是在碱性溶液中)，吖啶酯和吖啶酰胺类化合物由于发生部分水解而降低其稳定性。(在水溶液中当其受到OH-进攻时生成一假碱，假碱继续在OH-作用下酯键断裂，最后生成N-甲基吖啶酮，水解过程为不发光的暗反应过程。)水解机理如下图所示：
4）吖啶酰胺稳定性较高于吖啶酯结构,抗水解能力较强。
5）吖啶环或酚环或苯磺酰环上连有甲基等给电基团，由于空间位阻大，热稳定性增加;连有吸电子基团，有利于亲核取代反应而使其稳定性下降。
6）部分用户反馈蛋白标记后，过段时间发光量有所下降，建议：
偶联后保存用的缓冲液尽量用弱酸性的缓冲液，鼓氮气除去其中的氧气，密封避光低温保存，有条件的可以制成冻干样再保存。
7）48小时内可室温(20-25℃)运输，超过48小时需要在低温条件下运输。
参考文献：
[1] 尹东光, 贺佑丰, 刘一兵等. 几种主要化学发光物质的发光性能及其化学发光免疫分析体系. 标记免疫分析与临床, 2002, 12, 9(4): 225.
关键词：
吖啶盐（DMAE-NHS）,吖啶酯（ME-DMAE-NSH）,吖啶酯丙磺酸盐（NSP-SA）
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