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2022

AquaPhluor 593

　　　AquaPhluor 593　

荧光染料是修饰寡核苷酸最常见的标记，因为它们从测序到遗传分析的各种技术应用中提供非常灵敏的检测。Texas Red或Alexa Fluor 594并不适合寡核苷酸的合成和脱保护条件，为此，发现它们的替代品非常重要。

　　成为TexasRed的有效替代品，荧光团应有如下适用于寡核苷酸合成的特性：

　　1)其吸光度最大值需在590-600nm范围之内，荧光最大值约为615nm。

　　2)在标准的脱保护环境下性质稳定。

　　3)其亮度应对pH值的变化不敏感。

　　4)与其它染料(比如菁染料)不同，其发射光不应随着温度升高而显著淬灭。

　　而AquaPhluor 593正好具备这些特性，能够很好地替代Texas Red及Alexa Fluor 594染料：

（1）AquaPhluor 593最大吸收波长：593nm;最大发射波长：613nm;量子产率：0.6。

（2）AquaPhluor 593的荧光受pH值的影响比较弱，在pH5-8范围之内仅的变化百分之几。

（3）当从20℃加热到95℃时，AquaPhluor 593的荧光仅降低约30%。

AquaPhluor 染料其疏水性主要是受分子中带电磷酸盐基团控制，同时磷酸基团被三氟乙酰氨基丁基(TFAAB)保护，该基团在碱性环境下脱保护(其机制如下图1所示)，由此产生的带负电荷的磷酸盐与带正电荷的染料形成亲水两性离子。

　　AquaPhluor 593在使用上偶联时间建议为3min，含有AquaPhluor 593的寡核苷酸可以使用氢氧化铵进行脱保护，以下条件可得到优异结果：

（1）65°C下2小时(最优)

（2）室温下17小时(最优)

（3）55°C下17小时(较优)

　　注意：当使用快速裂解载体时，使用氢氧化铵脱保护可能会导致副反应，产生少量的非荧光杂质。为了避免杂质的出现，可以在裂解/脱保护之前用受阻碱(例如10%二乙胺 ACN溶液)处理载体2-3分钟。

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